ANALYSEVERFAHREN FÜR mRNA EINZELN LICHTBESTRAHLTER ZELLEN (German)

2018
  • Patent  /  Electronic Resource

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Verfahren zur Analyse der Nukleinsäuren, insbesondere der mRNA von Zellen, die einzeln mit Licht bestrahlt wurden. In dem Verfahren werden Nukleinsäurekonstrukte in Zellen eingebracht, um genetisch manipulierte Zellen zu erzeugen, die ein durch Einstrahlung von Licht aktivierbares Protein mit der Aktivität einer DNA-Rekombinase kodieren und durch die Wirkung der Rekombinase aus einem weiteren Nukleinsäurekonstrukt verschiedene Markerproteine exprimieren, die optisch detektierbar sind. Mittels der Markerproteine können Zellen optisch, insbesondere lichtmikroskopisch, identifiziert und lokalisiert werden, die die Markerproteine exprimieren, z.B. mittels FACS, und die Nukleinsäuren vereinzelter Zellen, insbesondere deren mRNA, kann analysiert werden, z.B. durch Sequenzieren oder Hybridisieren. Bevorzugt wird das Verfahren ohne Isolierung bzw. Vereinzelung und Abtrennung mit Licht bestrahlter Zellen vor der Analyse ihrer Nukleinsäuren durchgeführt.

A method of analysis of the nucleic acids, especially the mRNA, of cells that have been irradiated individually with light. In the method, nucleic acid constructs are introduced into cells in order to produce genetically manipulated cells that encode a protein activatable by incidence of light and having the activity of a DNA recombinase, and, through the effect of the recombinase, express various marker proteins from a further nucleic acid construct that are optically detectable. By means of the marker proteins, it is possible by optical means, especially by light microscopy, to identify and localize cells that express the marker proteins, for example by means of FACS, and to analyse the nucleic acids of isolated cells, especially the mRNA thereof, for example by sequencing or hybridizing. The method is preferably conducted without isolation or individualization and separation of light-irradiated cells prior to the analysis of their nucleic acids.

Procédé d'analyse des acides nucléiques, en particulier de l'ARNm de cellules qui ont été irradiées de lumière individuellement. Dans le procédé, des constructions d'acide nucléique sont introduites dans des cellules, pour générer des cellules manipulées génétiquement, qui codent une protéine pouvant être activée par irradiation, ayant l'activité d'une recombinase d'ADN et qui exprime à partir d'une autre construction d'acide nucléique par l'effet de la recombinase différentes protéines marqueurs qui peuvent être détectées optiquement. Les protéines marqueurs permettent d'identifier et de localiser optiquement, en particulier par microscope optique, des cellules qui expriment les protéines marqueurs, p. ex. par FACS, et les acides nucléiques des cellules individuelles, en particulier leur ARNm, peuvent être analysés, p. ex. par séquençage ou hybridation. Le procédé est exécuté de préférence sans l'isolement ni la séparation de cellules irradiées de lumière avant l'analyse de leurs acides nucléiques.

  • Title:
    ANALYSEVERFAHREN FÜR mRNA EINZELN LICHTBESTRAHLTER ZELLEN
  • Additional title:
    ANALYSIS METHOD FOR MRNA OF INDIVIDUALLY LIGHT-IRRADIATED CELLS
    PROCÉDÉ D'ANALYSE POUR L'ARNM DE CELLULES INDIVIDUELLES IRRADIÉES DE LUMIÈRE
  • Patent number:
    WO2020069918
  • Application date:
    2019-09-24
  • Patent applicant:
  • Patent family:
  • Author / Creator:
  • Publisher:
    Europäisches Patentamt
  • Year of publication:
    2018
  • Type of media:
    Patent
  • Type of material:
    Electronic Resource
  • Language:
    German
  • Classification:
    IPC:    C12N Mikroorganismen oder Enzyme, MICROORGANISMS OR ENZYMES / C12Q Mess- oder Untersuchungsverfahren unter Einbeziehung von Enzymen, Nukleinsäuren oder Mikroorganismen, MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS
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