Although differentiating pluripotent stem cells by temporarily differentiating the pluripotent stem cells into CTraS considerably increases the subsequent cell differentiation efficiency, it is difficult to stably induce pluripotent stem cells into CTraS in a reproducible manner, and thus, there is a problem in that, consequently, the efficiency of inducing the pluripotent stem cells to differentiate into target neural cells is low. In addition, in the case in which pluripotent stem cells need to be differentiated into target neural cells in the future, it is necessary to differentiate the pluripotent stem cells into the neural cells in a more efficient manner. The inventors of the present invention found a novel method capable of inducing pluripotent stem cells into a state in which the pluripotent stem cells are stable and easily induced to differentiate into neural cells in the future, and thus, demonstrated that the above problem can be solved. Specifically, the inventors demonstrated that the above problem can be solved by culturing cells for five days by adding four types of small molecules, namely, SB431542, LDN193189, SU5402, and EC23.
Bien que la différenciation des cellules souches pluripotentes par la différenciation temporaire des cellules souches pluripotentes en CTraS augmente considérablement l'efficacité de la différenciation cellulaire ultérieure, il est difficile d'induire de manière stable des cellules souches pluripotentes en CTraS de manière reproductible, ce qui pose un problème dans la mesure où l'efficacité de l'induction des cellules souches pluripotentes à se différencier en cellules neuronales cibles est faible. En outre, dans le cas où les cellules souches pluripotentes doivent être différenciées en cellules neurales cibles à l'avenir, il est nécessaire de différencier les cellules souches pluripotentes en cellules neurales d'une manière plus efficace. Les inventeurs de la présente invention ont découvert un nouveau procédé pouvant induire des cellules souches pluripotentes vers un état dans lequel les cellules souches pluripotentes sont stables et facilement induites à se différencier en cellules neurales à l'avenir, et ont ainsi démontré que le problème susmentionné peut être résolu. Plus particulièrement, les inventeurs ont démontré que le problème susmentionné peut être résolu en cultivant des cellules pendant cinq jours en ajoutant quatre types de petites molécules, à savoir SB431542, LDN193189, SU5402 et EC23.
多能性幹細胞がいったんCTraSを介することにより、その後の細胞分化の効率が大幅に上昇するものの、多能性幹細胞を安定的にCTraSに誘導する再現性が乏しく、結果的に目的とする神経系細胞への分化誘導の効率が悪いという問題点があった。また、将来的に多能性幹細胞から目的とする神経系細胞を分化させたい場合に、神経系細胞への分化をより効率化させることが必要であった。 本発明の発明者らは、多能性幹細胞を安定で、かつ将来的に神経系細胞への分化を誘導しやすい状態に誘導することができる新たな方法を見出すことにより、上記課題を解決することができることを示した。具体的には、4つの小分子、SB431542、LDN193189、SU5402、EC23を添加して5日間培養することにより、上記課題を解決することができることを示した。